一、稀释标准曲线样品（以 10E2- 10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例） 。 由于标准品浓度非常高 ，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行 ，千万不能  污染样品或本试剂盒的其他成分） 。为增加产品稳定性和避免扩散传ran  xing病原 ， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传ran性的 DNA 片段作为阳性对照。

        1.   标记 6 个离心管 ，分别为 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
        2.    用带芯枪头分别加入 45  μL 荧光 PCR 专用模板稀释液 ，用带芯枪头，

下同） 。
3.   在 7 号管中加入 5  μL 1×10E8 拷贝/μL  的阳性对照(试剂盒提供)，充分震

      荡 1 分钟 ，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品 。放冰上待用。

          4.   换枪头 ，在 6 号管中加入 5  μL 1×10E7 拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，
                得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
          5.   换枪头 ，在 5 号管中加入 5  μL 1×10E6 拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，
                得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

          6.   重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品 。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备
          7.   如果有 N 个样品，设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性
                对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000
                倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样 ，以此作为PC 。另外用水作为 NC。
          8.   用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容 。
                本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

四、数据处理

      12. 如果把本试剂盒用于定量检测 ，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴 ， 以 Ct 值为纵轴 ，绘制标准曲线 。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品

RNA 浓度的 log 值 ，再推算出其浓度。

      13. 如果把本试剂盒用于定性检测 ，只判断阳性或阴性 ，则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 40 。阳性对照  必须有荧光对数增长 ，有典型扩增曲线 ，Ct 值应该 小于或等于 30 。对待测样品 ，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性 ，如果小 于或等于 35 则为阳性 。如果在 35-40 之间 ，则重复一次 。重复实验的 Ct

值如果大于或等于 40 则为阴性 ，如果小于 40 ，则为阳性。