ELISA试剂盒都有什么方法？详细讲解elisa类型和方法优缺点

ELISA（酶联免疫吸附试验）详解

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种基于抗原-抗体特异性结合及酶催化显色反应的检测技术，用于定性或定量检测生物样本中的抗体、抗原、蛋白质等分子。其核心原理是通过酶标记的抗体（或抗原）与目标分子结合，加入底物后通过颜色变化（吸光度）判断目标浓度。


ELISA基本原理
1. 抗原-抗体结合：利用抗原与抗体的高特异性结合。
2. 酶标记信号放大：抗体或抗原与酶（如HRP、AP）偶联，催化底物显色。
3. 显色定量：通过吸光度值（OD值）计算目标物浓度。


ELISA通用步骤
1. 包被（Coating）：将抗原/抗体固定在微孔板表面。
2. 封闭（Blocking）：用无关蛋白（如BSA）封闭未结合位点，减少非特异性结合。
3. 加样孵育：加入待测样本（血清、细胞裂解液等），使目标分子与包被物结合。
4. 洗涤（Washing）：去除未结合物质。
5. 加酶标物：加入酶标记的抗体/抗原，与目标结合。
6. 显色反应：加入底物（如TMB），酶催化产生颜色变化。
7. 终止反应：加终止液（如硫酸）停止反应。
8. **检测读数**：用酶标仪测量OD值，分析浓度。


ELISA主要类型及方法

1. 直接ELISA
- 用途：检测抗原（如病原体蛋白）。
- 步骤：
  1. 包被已知抗体。
  2. 加入待测抗原。
  3. 加入酶标记的一抗（直接结合抗原）。
- 优点：步骤简单，耗时短。
- 缺点：灵敏度低，一抗需单独标记。

2. 间接ELISA
- 用途：检测抗体（如血清中IgG）。
- 步骤：
  1. 包被抗原。
  2. 加入待测血清（含目标抗体）。
  3. 加入酶标二抗（如抗人IgG-HRP）。
- 优点：信号放大（一个一抗结合多个二抗），灵敏度高。
- 缺点：可能发生交叉反应。

3. 夹心ELISA
- 分类：双抗体夹心法（检测抗原）或双抗原夹心法（检测抗体）。
- 步骤（以双抗体夹心法为例）：
  1. 包被捕获抗体（一抗）。
  2. 加入待测抗原。
  3. 加入检测抗体（酶标二抗）。
- 优点：特异性强，适合复杂样本（如细胞因子检测）。
- 缺点：需配对抗体（避免表位重叠）。

4. 竞争ELISA
- 用途：检测小分子（如激素、药物）。
- 步骤：
  1. 包被抗原（或抗体）。
  2. 同时加入待测样本（含目标分子）和酶标抗原（或抗体），两者竞争结合位点。
  3. 显色后，OD值与目标浓度成反比。
- 优点：适合小分子检测。
- 缺点：数据解释复杂，需标准曲线。


ELISA的优缺点
- 优点：
  - 灵敏度高（可达pg/mL级）。
  - 高通量（96孔板或384孔板）。
  - 操作标准化，适合临床和实验室。
- 缺点：
  - 需优化抗体和封闭条件。
  - 可能受交叉反应干扰。
  - 部分类型需配对抗体，成本较高。


应用领域
- 医学诊断：HIV抗体、COVID-19抗体、肿瘤标志物检测。
- 生物研究：细胞因子（如IL-6、TNF-α）、激素（如胰岛素）定量。
- 食品安全：过敏原、毒素检测。

通过选择不同类型的ELISA，可灵活应对多样化的检测需求，是现代免疫学研究的基石技术之一。